庆保平 陕西朱鹮国家级自然保护区
朱鹮（Nipponia nippon）是鹳形目（Ciconiiformes）鹮科（Threskiornithidae）鸟类，中等体型涉禽，是世界濒危物种，东亚地区特有鸟类。20世纪80年代，朱鹮野生种群仅有7只残存于陕西省洋县。经过30多年的努力，种群数量已增加到超过2000只。目前，我国已解决了朱鹮饲养繁殖方面的难题，但关于朱鹮疫病方面的研究鲜有报道。禽流感、新城疫均属于感染率强、致死率高的烈性传染病，易通过候鸟传染给各种留鸟。朱鹮保护区正好位于候鸟迁徙通道，因而调查朱鹮及其伴生鸟的禽流感、新城疫感染情况很有必要。
早期，禽流感和新城疫等病毒性疾病主要通过病毒分离与鉴定和一些血清学诊断技术如血凝抑制试验、琼脂凝胶扩散试验、免疫荧光技术、乳胶凝集试验、酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫组化技术等传统方法进行检测。近年来，一种新兴技术胶体金技术因其准确、快捷、方便的优点广泛使用，其主要是根据ELISA和胶体金层析技术，采用双抗体夹心法研制的（张蓉蓉，2009）。为追求高度特异性及高度敏感性，科研工作者还建立了一系列病毒的分子生物学诊断技术，如PCR技术、基因芯片技术和核酸探针等。不可否认，分子生物学技术具有更高的敏感性和准确性，但其的使用建立在具有一定分子生物学设备的基础上，而胶体金检测卡无需设备，可以现场进行禽流感、新城疫等的检测，20 min内即可初步判断是否有禽流感病毒和新城疫病毒的感染，可广泛应用于流感病毒的早期诊断。本项目主要利用胶体金法对朱鹮及其伴生鸟健康状况进行调查，为朱鹮的保护决策提供科学依据。
1 材料和方法
1.1材料
1.1.1调查对象
陕西汉中朱鹮国家级自然保护区朱鹮124只（野外救助病伤、死亡朱鹮20只，人工饲养朱鹮18只，野生朱鹮幼鸟86只），朱鹮伴生鸟类40只（34只鹭鸟和其他鸟类6只），在朱鹮觅食地与朱鹮一起活动的家禽28只（鸭26只、鸡2只），试验动物来源地点见表1。
1.1.2主要试剂
深圳真瑞生物科技有限公司《新城疫抗原快速检测卡》和《禽流感病毒（通用）抗原快速检测卡》
1.2方法
1.2.1样品采集
用灭菌棉签在选取的朱鹮及其伴生鸟泄殖腔内壁上反复旋转擦拭获取粪样。
1.2.2样品检测
1.2.2.1获取粪样后立即将粪样棉签插入诊断试剂缓冲液的试管中，在试管壁用力反复旋转10次以上，使样品尽可能溶解在溶液中；
1.2.2.2若粪便颗粒过大，则静置1-2 min，使大颗粒沉淀；
1.2.2.3从密封袋中取出检测卡，将检测卡放置在平整表面，用吸管从试管内吸取上层清亮液体，缓慢、逐滴的准确滴加5滴到有S标记的加样孔内；
1.2.2.4在室温下放置10-15 min判断结果。
阳性：检测线（T线）和对照线（C线）都显示酒红色的反应；
阴性：检测线（T线）上没有颜色反应，只是在对照线（C线）上显示酒红色的反应；
失效：在观察孔内，对照线区（C）和检测线区（T）都不出现色线；或仅检测线区（T）出现色线。
2 结果
共检测样品192个，其中洋县128个、城固22个、西乡16个、南郑2个、勉县1个、留坝1个、朱鹮救护饲养中心18个和种源基地4个。结果所示，仅城固县原公镇东原公村一只朱鹮检测到禽流感、新城疫可疑（检测线肉眼可见模糊的酒红色线）；其余朱鹮及其伴生鸟均为禽流感、新城疫阴性。
在可疑样本的处理处理上，我们采用重复试验和实地访问调查的方法进行验证。在对可疑样本的重复检测实验上，依然得到了禽流感和新城疫均为可疑的结果，非常遗憾的是由于设备限制未能及时采集血液进行相应的抗体检测，其后幼鸟出飞彻底丧失了确诊的机会。但是调查人员分别在当年的6月和次年的3月前往该地进行访问调查，了解到该区域未发生过家禽和野鸟大量死亡的案例。
本研究中所有样本均采集于陕西汉中朱鹮国家级自然保护区及周边区域。该区域为朱鹮栖息地，同时又是候鸟迁飞通道，也是朱鹮伴生鸟白鹭等鹭科鸟类主要的繁殖地。该区域内农村居民有散养家禽的习惯，鸡鸭的活动地与朱鹮的栖息地部分重合。这些均为禽流感、新城疫等烈性传染病感染朱鹮， 对其造成生存危机埋下安全隐患。
禽流感（Avian Influenza, AI）是由正粘病毒科、流感病毒属A型流感病毒（AIV）引起的一种禽类疾病综合征。禽流感病毒在禽类中广泛存在，除家禽外，野生鸟类也是禽流感病毒的天然宿主，该病被国际卫生组织（OIE）列为A类传染病，我国也列为一类动物疫病（王建荣，2006）。目前，关于朱鹮禽流感病毒株的分离鲜有报道，仅2011年有一例从朱鹮体内分离到A型禽流感病毒毒株的报道（李六斤，2011）。但近几年内时有野禽及迁徙鸟类发病的报道，也已证实候鸟的迁徙是禽流感疫病在全球蔓延主要途径。本试验通过对朱鹮保护区和周边地区朱鹮及伴生鸟类进行禽流感病毒检测，检测结果除一例显示可疑外均为阴性，实地调查也未发现家禽和大量野鸟死亡事件，基本可以认定该区域暂无禽流感病毒感染朱鹮的危险。但在禽流感高发季节，仍需时刻注意预防工作，最好定期对朱鹮饲养笼舍、野生朱鹮集中夜宿地等区域每天做好消毒工作。季铵盐类消毒剂、二氯异腈脲酸钠、过氧乙酸、碘制剂等对禽流感病毒均有很好的消毒效果（刘学宽，2015）。
新城疫（Newcastle disease, ND）又名亚洲鸡瘟，是由新城疫病毒（Newcastle diseasvirus, NDV）引起的一种多病型的高度接触性传染病，该病在世界范围内广泛流行（牛定玲，2015）。野生鸟类是新城疫病毒的主要宿主，研究野生鸟类中新城疫病毒的流行情况，对于防控新城疫的爆发有着重要意义（张鹏，2009）。2001年范光丽等、2003年曲红利等以及2006年贾文孝等先后对朱鹮新城疫进行了报道。本试验通过对朱鹮保护区和周边地区朱鹮及伴生鸟进行新城疫病毒检测，检测结果除一例为可疑外其余样本均为阴性，实地调查也未发现家禽和大量野鸟死亡事件。但鉴于早期有朱鹮感染新城疫的报道，因此应对朱鹮栖息地范围内的候鸟、家禽做好监测管理工作,防止将疫病传染给朱鹮种群。同时，保护区应密切观察朱鹮种群表现，定期进行新城疫抗原和抗体检验，随时做好准备，防患于未然。
本项目调查中虽未发现朱鹮及其伴生鸟类、家禽感染新城疫和禽流感情况，但调查中也发现了诸如朱鹮和农户散养鸡鸭一起觅食、朱鹮活动区内存在多家家禽养殖场等问题，这些需要我们高度警惕和关注，建议保护区或相关管理部门加强监督管理，对朱鹮重要觅食地、夜宿地周边的散养家禽进行灭活苗免疫。
致谢 感谢科研科、保护科、花园保护站、龙亭保护站、朱鹮生态园和华阳种源基地同事们对本项目开展的大力协助！
参考文献
张蓉蓉, 罗青平, 温国元, 等. 禽流感诊断方法研究进展[J]. 安徽农业科学, 2009, 37(22): 10507-10510.
王建荣, 杨木肖, 邹红菲, 等. 野生鸟类与禽流感[J]. 野生动物杂志, 2006, 27 (4) : 24-26.
李六斤, 毛峰峰, 师长宏, 等. 朱鹮低致病性禽流感病毒的分离与鉴定[J]. 动物医学进展, 2011, 32 (2): 42-44.
刘学宽, 高胜国. 高致病性禽流感的发生及防治[J]. 兽医导刊, 2015(2): 95-95.
牛定玲, 王蓉. 鸡新城疫病的诊治[J]. 中兽医学杂志, 2015(12).
张鹏. 野生鸟类新城疫病毒的分离鉴定及其F与HN基因的分子特征研究[D]. 西北农林科技大学, 2009.
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